Острые кишечные инфекции методом ПЦР, скрининг (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus)

• О методе ПЦР
• Цены на ПЦР диагностику

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – на сегодняшний день самый быстрый и достоверный метод диагностики инфекционных заболеваний.
Принцип метода полимеразной цепной реакции был разработан Кэри Мюлисом (Kary Mullis) в 1983 г. За свое открытие К. Мюллис в 1993 г получил Нобелевскую премию по химии.

Метод ПЦР позволяет добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). Метод основан на многократном избирательном копировании (амплификации) определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях.

Преимущества метода ПЦР диагностики как метода диагностики инфекционных заболеваний

Прямое определение наличия возбудителей

Многие традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что дает лишь опосредованное свидетельство наличия инфекции. Выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР дает прямое указание на присутствие возбудителя инфекции.

Высокая специфичность

Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров, что исключает возможность получения ложных результатов, в отличие от иммунологических методов анализа, где нередки ошибки в связи с перекрестно-реагирующими антигенами.

Высокая чувствительность

Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР анализ обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Чувствительность ПЦР анализа составляет 10-100 клеток в пробе (чувствительность иммунологических и микроскопических тестов — 103-105 клеток).

Универсальность процедуры выявления различных возбудителей

Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК возбудителя. Метод основан на выявлении фрагмента ДНК или РНК, являющегося специфичным для конкретного организма. Сходство химического состава всех нуклеиновых кислот позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований. Это дает возможность диагностировать несколько возбудителей из одной биопробы.

Высокая скорость получения результата анализа

Для проведения ПЦР анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени. Унифицированный метод обработки биоматериала и детекции продуктов реакции и автоматизация процесса амплификации дают возможность провести полный анализ за 4-5 часов.

Возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и персистирующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов.

Shigella и энтероинвазивные штаммы E.coli, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Молекулярно-генетический анализ, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителей шигеллеза и эшерихиоза в кале.

Для чего используется этот анализ?

• Для диагностики кишечных инфекций, вызванных бактериями рода Shigella или энтероинвазивными E. coli.

Когда назначается анализ?

• При наличии симптомов острой кишечной инфекции (диарея, кровь в стуле, лихорадка, боли в животе);
• при обследовании контактных лиц.

Синонимы русские

Шигеллы и энтероизвазивные кишечные палочки (ЭИКП) (эшерихии, колибактерии), возбудители шигеллеза (бактериальной дизентерии) и эшерихиоза.

Синонимы английские

Shigella species and enteroinvasive Esherichia coli (EIEC), DNA, PCR, fecal samples.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Кал.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Shigellaspeciesи Esherichiacoli– грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. В норме шигеллы и энтероинвазивные кишечные палочки (ЭИКП) отсутствуют в организме. Их выявление указывает на кишечную инфекцию, которая требует лечения пациента и ограничения распространения заболевания.

К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии).

Бактерии рода E. coli различаются между собой по биохимическим и патогенным свойствам. Не все E. coli, а только некоторые биовары и серотипы колибактерий способны вызывать эшерихиоз. Типичные колибактерии являются представителями нормальной микробиоты кишечника человека, участвуют в процессах пищеварения и относятся к условно-патогенной среде. Кишечные палочки, которые синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способствуют развитию эшерихиоза, который протекает по типу инвазивной острой кишечной инфекции (дизентерии). ЭИКП, так же как и шигеллы, могут проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника.

Шигеллы и кишечные палочки распространяются фекально-оральным механизмом передачи, который реализуется пищевым, водным и контактно-бытовым путями.

Инкубационный период составляет от нескольких часов до нескольких дней и зависит от количества бактерий, их патогенных свойств и особенностей защитных механизмов человека. Заболевание может протекать как в легких формах со стертой симптоматикой, так и с развитием тяжелой инфекции. Признаки шигеллеза и энтероинвазивного эшерихиоза схожи: острое начало, резкая боль в животе, многократный стул с примесью слизи и крови, спазм сигмовидной кишки, общая интоксикация.

Около 8 % случаев инвазивного эшерихиоза приводит к гемолитико-уремическому синдрому, который проявляется острой почечной недостаточностью, гемолитической анемией, тромбоцитопенией и пурпурой.

После выздоровления возможно длительное выделение бактерий с калом (характерно для шигеллеза), что способствует распространению инфекции.

Необходимо также учитывать, что существует несколько патологических состояний и кишечных инфекций, которые сопровождаются вышеуказанной симптоматикой, но лечатся по-разному. При обследовании пациента с кровавой диареей необходимо в первую очередь исключить шигеллез, эшерихиоз, амёбиаз, отравление химическими веществами, язвенный колит, болезнь Крона, острую кишечную непроходимость и тромбоз сосудов брыжейки.

Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральным методом благодаря быстрому получению результатов и высокой специфичности и чувствительности исследования. Быстрая диагностика острых кишечных инфекций позволяет избежать лишних инвазивных процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики шигеллеза;
• для диагностики эшерихиоза;
• для дифференциальной диагностики острых кишечных инфекций.

Когда назначается исследование?

• При наличии симптомов острой кишечной инфекции (диарея, прожилки крови в стуле, боль в животе, спазм сигмовидной кишки);
• после недавно перенесенного заболевания, сопровождающегося примесью крови в стуле;
• при обследовании лиц, контактировавших с больным шигеллезом или эшерихиозом;
• при обследовании пациентов с гемолитико-уремическим синдромом.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

• шигеллез и/или эшерихиоз;
• транзиторное бактерионосительство.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие инфицирования бактериями рода Shigella и энтероинвазивными E. coli.

Что может влиять на результат?

При загрязнении материала вероятен ложноположительный результат.

Важные замечания

Данный метод исследования не позволяет точно определить вид возбудителя инфекции, но дает возможность оценить клиническую ситуацию и своевременно назначить адекватную терапию. Одновременно необходимо взять кал для бактериологического исследования с определением чувствительности к антибиотикам.

Также рекомендуется

• anti-Shigella flexneri 1-5, anti-Shigella sonnei
• Salmonella species, ДНК [ПЦР]
• Rotavirus A, РНК [ПЦР]
• Дисбактериоз кишечника с определением чувствительности к антибиотикам и бактериофагам
• Посев кала на патогенную флору (диз. группа и тифо-паратифозная группа)
• Посев кала на условно-патогенную флору с определением чувствительности к антибиотикам
• Анализ кала на цисты и вегетативные формы простейших
• Копрограмма

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, терапевт.

Литература

• Возианова Ж. И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3 т. — К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 405-433, 524-564.
• Gómez-DuarteO., BaiJ., NewelE.. DetectionofE. coli, Salmonellaspp., Shigellaspp., Yersiniaenterocolitica, Vibriocholerae, and Campylobacter spp. enteropathogens by Three-reaction Multiplex PCR. Diagn Microbiol Infect Dis. 2009 January; 63(1): 1–9. PMCID:PMC2701628.

Материалом для осуществления ПЦР-диагностики могут служить

• Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек. Обычно используются для диагностики заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), таких как гонорея, хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез, герпетическая и другие инфекции, поражающие слизистые оболочки.
• Моча. Моча может использоваться при инфекционном поражении мочеполового тракта у мужчин и мочевыделительных органов у женщин (у мужчин использование в качестве материала мочи заменяет эпителиальный соскоб).
• Мокрота. Мокрота используется для диагностики туберкулеза и реже для диагностики респираторных форм хламидиоза и микоплазмоза. Мокроту в количестве 15-20 мл собирают в стерильный (одноразовый) флакон.
• Кровь, плазма, сыворотка. Используются для ПЦР анализа вирусов гепатитов B, C, D, G, герпеса, ЦМВ, ВИЧ, исследования генов человека.
• Биологические жидкости. Сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, слюна забираются по показаниям.
• Биоптаты. Чаще всего используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки для выявления хеликобактерной инфекции.

Анализ на хеликобактер пилори

Зачастую проблемы, связанные с желудком, провоцирует патогенная бактерия – хеликобактер пилори. Она имеет вид спирали и признана патогенным микроорганизмом-паразитом. В условиях человеческого организма она размножается и начинает вырабатывать токсины, которые в дальнейшем поражают слизистую оболочку двенадцатиперстной кишки и желудка.

Содержание:

• Анализ на хеликобактер пилори
• Когда назначают анализ кала на хеликобактер
• Подготовка и проведение анализа
• Расшифровка результатов

Хеликобактер относится к таким бактериям, которые способны вызвать воспалительный процесс, с последующим развитием гастрита или язвы. Раньше врачи связывали боль в желудке только с неправильным питанием, и пациентам с подобными симптомами назначались специальные диеты. Но с открытием хеликобактер пилори, доказано что причиной язвы и гастрита на самом деле часто является данный микроорганизм. Пути передачи хеликобактерной инфекции не совсем ясны и по настоящее время. Имеются доказательства гастро-орального, орально-орального и фекально-орального пути передачи. Определенную роль играют и генетические факторы.

Поэтому, чтобы избежать подобных ситуаций, нужно знать первые правила профилактики и периодически сдавать соответствующие анализы. Следует отметить тот факт, что практически все бактерии гибнут в условиях кислой среды, однако хеликобактер пилори к ней быстро привыкает и осваивается. Микроорганизмы способны развиваться в кислой желудочной среде.

Благодаря своим свойствам данный паразит легко проникает по стенкам пищевода и приспосабливается к разным средам, особенно к агрессивным. Передвигается бактерия с помощью маленьких жгутиков, которые легко присасываются к слизистой оболочке. С каждым днем все больше и больше людей заражаются этим микроорганизмом. В России в несколько десятков раз чаще диагностируется заболевание, по сравнению с жителями Европы и Соединенных Штатов Америки.

Специалисты связывают это с низким уровнем жизни, неправильной гигиеной, проживанием в антисанитарных условиях и многим другим.

Стоимость ПЦР анализа в нашем медцентре

р.д. — рабочий день, кол. — количественный, кач. — качественный, ген. — генотипирование, АЖ — амниотическая жидкость, БАЛ — бронхо-альвеолярный лаваж, СМЖ — спинно-мозговая жидкость, ПЖ — плевральная жидкость

Рейтинг 3.00 (35 Голосов)